三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀-TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)測定人血漿中變腎上腺素類物質(zhì)和3-甲氧酪胺含量
兒茶酚胺（Catecholamine, CA）是人體重要的神經(jīng)遞質(zhì)和激素。其在嗜鉻細胞內(nèi)的兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（Catechol-O-methyltransferase, COMT）的催化作用下代謝成變腎上腺素類物質(zhì)（Metanephrines, MNs），包含甲氧基腎上腺素（Metanephrine, MN）和甲氧基去甲腎上腺素（Normetanephrines, NMN）。由于MNs較CA的半衰期長，性質(zhì)穩(wěn)定且能直接反映嗜鉻細胞的狀態(tài)，因此臨床上通過檢測血液中MNs的含量來輔助診斷嗜鉻細胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤，是《嗜鉻細胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤診斷治療專家共識（2020版）》《中國繼發(fā)性高血壓臨床篩查多學(xué)科專家共識（2023）》等專家共識推薦的首選標志物。
目前MNs分析方法主要包括HPLC法和免疫法，前者靈敏度較低，后者特異性較差。本方法采用ANYEEP TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，同時檢測人血漿中甲氧基腎上腺素、甲氧基去甲腎上腺素和3-甲氧酪胺（3-Methoxytyramine, 3-MT）。
安益譜TQ9100三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀
實驗部分
樣品處理：取待測樣本500μL于1.5mL EP管中，加入內(nèi)標溶液20μL，渦旋混勻（2500 rpm，30s）。使用WCX填料的96孔固相萃取板，先用200μL水活化，待水流干后，加入上述樣本，通過正壓萃取裝置進行固相萃取。待樣本流干后先后加入500μL水和500μL乙腈淋洗樣本。待淋洗液流干后，加100μL乙腈（含2%FA）洗脫樣本。洗脫液25℃氮氣吹干10min，用100μL復(fù)溶液（50%乙腈，含0.1%甲酸）復(fù)溶。20μL進樣。
色譜條件：色譜柱使用Phenomenex Kinetex F5 Column 3.0mm×100mm 2.6μm進行液相分離，流動相A為水（含0.1%甲酸），流動相B為乙腈，柱溫40℃，梯度設(shè)置見表1。
質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子化源正離子模式（ESI+）多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）進行質(zhì)譜掃描。離子化源溫度550℃，噴霧電壓5000V，氣簾氣20psi，霧化氣為60psi，輔助加熱氣為60psi，碰撞氣8，EP 7.5V，CXP 0V。各化合物離子對參數(shù)見表2。
表2 MNs、3-MT及內(nèi)標MRM離子對參數(shù)
結(jié)果與討論
MN、NMN和3-MT的提取離子圖見圖1，保留時間、線性范圍、回歸方程（權(quán)重1/x）、精密度（以RSD%計）和準確度（以回收率%計）見表3。
從表中可見，回歸方程r2均大于0.996（即r大于0.998），精密度（RSD%）均小于10%，回收率在91.7%-106.3%之間。
圖1 MN、NMN和3-MT LLOQ提取離子圖
從上到下依次為MN、NMN和3-MT
總結(jié)
本方法使用安益譜全自主研發(fā)生產(chǎn)的TQ 9100三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，實現(xiàn)了血漿中變腎上腺素類物質(zhì)和3-甲氧酪胺的同時檢測，該方法線性好、準確度高、重復(fù)性好。
